ИФА – иммуноферментный анализ крови: расшифровка

Анализ крови на ВИЧ или тест на ВИЧ включает в себя несколько методов лабораторной диагностики, позволяющих выяснить присутствие вируса иммунодефицита (ВИЧ), обнаружить антитела к его белкам (иммуноглобулины) или антигены (белки вируса) в крови больного, слюне или моче. Вирусу иммунодефицита человека присуща уникальная антигенная изменчивость, что связано с большой скоростью транскрипции (размножения), в связи с чем затрудняется как диагностика ВИЧ-инфекции, так и ее профилактика.

В основе диагностики ВИЧ-инфекции, как и любого другого инфекционного заболевания лежит:

  • эпидемиологический анамнез,
  • характерные жалобы больного,
  • клиническая картина заболевания,
  • данные лабораторных методов исследования.

Как только диагноз ВИЧ-инфекции установлен, с целью уточнения характера течения основного заболевания и вторичных заболеваний проводится дальнейшее обследование больного и назначается соответствующее лечение.

Тяжесть заболевания оценивается по уровню концентрации вирусов в крови, количеству CD4-лимфоцитов и определению антигена р24.

Основные виды диагностики ВИЧ-инфекции

Вирусологическая диагностика основана на выявлении ВИЧ в тканях и биологических жидкостях больного.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) применяется с целью выявления вируса и оценки вирусной нагрузки, что позволяет судить об эффективности специфического лечения и прогнозировать течение инфекционного заболевания.

Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции предполагает выявление антигенов вируса и антител в сыворотке крови. Обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека с помощью ИФА (иммуноферментного анализа) является основным методом лабораторной диагностики. Все положительные результаты подтверждаются методом иммуноблоттинга. Экспресс тест на ВИЧ основан на выявлении антител в крови и биологических жидкостях исследуемого. Используются в случаях, когда необходимо быстро получить результат.

Уровень иммуносупрессии определяется методикой подсчета СD4 и СD8-лимфоцитов, с последующим определением соотношения CD4 : CD8.

Каждый из лабораторных методов диагностики ВИЧ-инфекции характеризуется определенной чувствительностью (% верно определенных среди заведомо (+) образцов) и специфичностью (% правильно определенных тестов среди заведомо отрицательных образцов). Результаты теста на ВИЧ интерпретируются как отрицательные, положительные или сомнительные.

Рис. 1. На фото слева ВИЧ заражают иммунную клетку (обозначено желтым). На фото справа лимфоцит, поражённый ВИЧ. Вытянутые структуры на поверхности клетки вызваны гиперпродукцией белка.

Рис. 2. На фото зафиксирован процесс выхода (отпочкования) вирионов из инфицированной клетки.

В связи с развитием клеточных технологий, молекулярной биологии, генетики, физики, химии и ряда других высокотехнологичных дисциплин в повседневную практику внедряются новые высокоточные и высокотехнологичные методы. Данные междисциплинарные тенденции затрагивают и область медицинских знаний, и смежные области биологических, биохимических проблем. За последние десять лет получил широкое распространение и внедрение в массовую практику метод клинической лабораторной диагностики под названием иммуноферментный анализ.
Вообще технологии иммунологических ферментативных и радиологических реакций широко использовались в типировании клеток, культур клеток, различных тканей с начала 80-х годов XX столетия. Однако методы эти были очень трудоемкими, не унифицированными, не стандартизированными, что исключало их использование в лечебно-диагностических целях в массовом порядке. Такими методами пользовались лишь узкие, наукоемкие и высокоспециализированные лаборатории.
Однако с развитием техники, микротехники, производства различных биополимерных материалов стало возможным производить готовые наборы иммуноферментной диагностики, которыми смогут пользоваться лаборатории лечебно-профилактических учреждений широкого профиля. ИФА широко используется для диагностики всевозможных инфекций (хламидиоз, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоз, герпес и т.д.), как острых, так и хронических, а также скрытых форм, которые протекают без клинических симптомов.Также этот метод применяют для контроля над хроническими заболеваниями. Давайте постараемся разобраться, что это за метод, и какие принципы лежат в его основе?

Анализ крови на ВИЧ. Что надо знать

Анализ крови на ВИЧ может сделать любой житель нашей страны по своему желанию анонимно и бесплатно. Но есть категории лиц, которые обследуется на ВИЧ в обязательном порядке. К ним относятся:

  • все доноры крови и ее компонентов, а также тканей и других биологических жидкостей;
  • лица, которым была проведена трансфузия или осуществлена трансплантация (проводится в течение первых 3-х месяцев после проведения процедуры);
  • беременные;
  • лица, пострадавшие в результате аварии;
  • лица, имеющие клинические показания — лихорадку, диарею, постоянный кашель и увеличение более 2-х групп лимфатических узлов, длящиеся более 1-го месяца, необъяснимую потерю веса, СПИД-ассоциированные и оппортунистические инфекционные заболевания, соматическая и онкопатология;
  • иностранные граждане;
  • лица из группы риска (наркоманы и страдающие венерическими заболеваниями).

Тест на ВИЧ необходимо проводить всем, кто был подвергнут риску заражения.

Рис. 3. Анализ крови на ВИЧ в нашей стране можно сдать анонимно и бесплатно.

Где сдать кровь на ВИЧ

Анализ на ВИЧ можно сдать бесплатно в учреждениях здравоохранения, работающих на бюджетной основе при наличии паспорта и медицинской страховки. Врачи при этом обязаны хранить врачебную тайну. Бесплатно и анонимно можно сдать анализ в Центрах профилактики и борьбы со СПИДом и там же получить врачебную консультацию до и после обследования. На платной основе проводится тестирование на ВИЧ в коммерческих лечебных учреждениях. Тест на ВИЧ может пройти любой человек, временно проживающий на данной территории.

В лаборатории будет сделан анализ крови на ВИЧ иммуноферментным методом (ИФА).

Анализ на ВИЧ анонимно

В государственных учреждениях здравоохранения (поликлиниках и больницах) анонимно сдать анализ крови на ВИЧ нельзя. Сведения о результатах исследования будут известны узкому кругу медиков, которые обязаны хранить врачебную тайну.

Кабинеты анонимного тестирования существуют на базах Центров СПИДа, где каждому исследованию присваивается номер.

Рис. 4. Пробирки с кровью отправляются на серологическое исследование.

Анализ на ВИЧ принудительно

Существует четыре группы населения, тестирование на ВИЧ которых является обязательным, но не насильственным:

  1. Доноры крови и другого биологического материала.
  2. При устройстве на работу в учреждения, где работник может иметь контакт с заведомо инфицированным материалом и больными.
  3. Иностранные граждане при получении виз для проживания (более 3-х месяцев) на территории РФ.
  4. При наличии клинических показаний лицам, находящихся в местах лишения свободы.

Принудительное тестирование населения на ВИЧ является бесперспективным и противоречит соблюдению прав человека. Принудительное тестирование населения в РФ является незаконным.

Рис. 5. Тестирование на ВИЧ осужденных проводится по клиническим показаниям.

Сколько стоит анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях обследование на ВИЧ бесплатное, в частных клиниках — платное:

  • Стоимость ИФА составляет от 400 до 800 руб. Ответ будет готов по истечении одних суток. Существует срочная диагностика, когда ответ можно получить в течение 2-х часов.
  • Стоимость анализа на ВИЧ методом иммуноблота составляет от 3 до 5 тыс. рублей. Результат будет готов через 4 — 7 дней.
  • Стоимость теста на ВИЧ методом ПЦР составляет 10 — 12 тыс. руб. Результат будет готов через 10 — 14 дней.

Сколько делается анализ на ВИЧ

В государственных учреждениях срок получения результатов анализа на ВИЧ составляет:

  • При применении ИФА 3-го поколения результаты дают самый достоверный результат через 12 недель от момента предполагаемого инфицирования.
  • При применении ИФА 4-го поколения — 6 недель.
  • При применении ПЦР — 4 недели.

Как сдавать анализ на ВИЧ

  • Сдавать анализ на ВИЧ необходимо не ранее, чем через 3 — 4 недели от предполагаемого заражения.
  • Тестирование проводится не ранее, чем через 8 часов после приема пищи.

Из жидкости можно употреблять только обычную воду.

  • Для анализа осуществляется забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены, для чего используется обычный шприц или игла с помпой.
  • До транспортировки в лабораторию сыворотка крови может храниться в холодильнике до 7-и дней. Без холодильника не более 30 минут после забора.
  • Транспортировка пробирок с сывороткой крови осуществляется в специальных термоконтейнерах при температуре +4 — +8оС.

Рис. 6. Для анализа на ВИЧ необходимо провести забор 3 — 5 мл крови, взятой из локтевой вены — для чего используется обычный шприц (фото слева) или игла с помпой (фото справа).

При заборе крови из вены вирусом иммунодефицита человека заразиться невозможно.

Когда необходим анализ крови на RW

В целях профилактики тестирование проводится для медицинских работников. Особенно тех, которые контактировали с заболевшими. Рекомендуется сдавать кровь беременным женщинам. Если возбудитель попадет в их организм, возникают врожденные патологии, выкидыш. Перед назначением исследования, врач рассказывает, что это такое.

Анализ на RW рекомендуется проводить внепланово по показаниям:

  • проявление клинической симптоматики заболевания в виде сыпи, язв слизистой оболочке, увеличении лимфатических узлов, выделениях из половых органов;
  • случайный половой контакт без средств контрацепции;
  • люди, работающие с продуктами питания;
  • люди из сферы обслуживания, контактирующие с жидкостями, иными частями тела (парикмахеры, косметологи);
  • правоохранительные органы (военные, полицейские).

Внимание! Каждый пациент должен знать, что анализ крови на RW может быть положительным только через 1-2 месяца после полового контакта, соприкосновения с жидкостями зараженного пациента. До этого момента проходит инкубационный период, тест будет отрицательным.


Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?

ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…

Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?

Спецпредложения, скидки и акции помогут существенно сэкономить на медицинском обследовании.
Посмотреть текущие акции…

Контроль качества лабораторных исследований, осуществляемый по международным стандартам, — дополнительная гарантия точности результатов анализов.
Что учесть при выборе независимой лаборатории?

Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.

Недостатки метода ИФА

К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.

В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека. ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.

Куда обращаться, как долго ждать и сколько платить?

При наличии всего необходимого инструментария и расходных материалов можно будет получить результат уже через 2 дня после сдачи. Если в лаборатории есть услуга экспресс-анализа, то обработать пробу могут всего за 3-5 часов.

Где можно сдать ИФА:

  • в государственной поликлинике;
  • в частных клиниках.

Расценки на иммуноферментный анализ напрямую зависят от уровня цен в конкретной клинике, в среднем его цена составляет не менее 4000 рублей.

Сведения, полученные в результате этого исследования, могут стать полезным вкладом в медицинскую науку, однако, пациенту следует помнить, что, поскольку стоимость иммуноферментного анализа так высока, разумнее будет доверить эту процедуру надёжной проверенной временем клинике.

К сожалению, государственные медицинские учреждения не всегда бывают оборудованы по последнему слову науки. Необходимых приспособлений для качественного забора биоматериала и его обработки в районной поликлинике может и не быть.

При выборе клиники для проведения ИФА следует проверить наличие у этого заведения общепризнанных международных сертификатов.

Итак, чем полезен для пациента иммуноферментный анализ крови:

  • позволяет обнаружить глистную инвазию ещё на ранней стадии;
  • как следствие этого, позволяет своевременно начать лечение;
  • устойчивость методов даёт возможность проводить анализ с равной точностью у детей и у взрослых.

Иммуноферментный анализ демонстрирует не только качественный, но и количественный фактор, то есть не только указывает на сам факт наличия гельминтов в организме пациента, но и даёт возможность оценить их число.

В каких случаях применяется данный вид анализа?

Иммуноферментный анализ широко используется в диагностике самых разных заболеваний. Главная его ценность в том, что он позволяет с высокой точностью выявлять болезни, протекающие бессимптомно.

Как известно, такие болезни нередко бывает проблематично обнаружить на ранней стадии и, соответственно, вовремя начать лечить.

Какие заболевания диагностируют при помощи иммуноферментного анализа:

  • онкологические заболевания;
  • инфекции, передающиеся половым путём (ВИЧ, хламидиоз, сифилис, уреаплазмоз, герпес и другие заболевания);
  • туберкулёз, корь, токсоплазмоз, гепатиты и так далее;
  • гормоны щитовидной железы;
  • половые гормоны;
  • различные аутоиммунные расстройства;
  • аллергические реакции и непереносимость отдельных продуктов питания.

Ложноположительный анализ на ВИЧ и другие виды результатов исследования

Результаты анализа на ВИЧ могут трактоваться как положительные, отрицательные и сомнительные.

Сомнительный результат теста на ВИЧ получается при присутствии в сыворотке крови антител, которые перекрестно реагируют с белками вируса иммунодефицита человека. Анализ в данном случае сдается повторно, а при его проведении будут применяться белее специфичные тест-системы. Если сомнительный результат сохраняется, то тестирование необходимо проводить каждые 1 — 3 месяца в течение полугода.

Положительный результат теста на ВИЧ (серопозитивный) говорит о наличии в крови исследуемого антител к вирусу. В данном случае иммуноферментный анализ (ИФА) повторяется и при получении повторного положительного результата подтверждается тестом иммуноблотинга с тем же образцом крови.

Отрицательный результат теста на ВИЧ (серонегативный) говорит об отсутствии ВИЧ-инфекции, либо инфицирование произошло совсем недавно и в крови обследуемого еще не выработались антитела (период «окна»). В таком случае обследование следует повторить через 3 и 6 месяцев.

Ложноположительный результат теста на ВИЧ регистрируется тогда, когда его причиной явился не вирус иммунодефицита человека, а беременность, аутоиммунное заболевание, аллергия, любое другое инфекционное заболевание, недавно сделанная прививка, онкопатология, трансплантация органа и даже обычная еда (семечки, острая, жирная и кислая пища, употребленная накануне, и даже минеральная сильногазированная вода). Большое количество ложноположительных результатов получается при проведении тестирование в домашних условиях.

Ложноотрицательный результат теста на ВИЧ говорит о том, что вирус в крови больного присутствует, но антитела еще не выработались. При проведении анализа ПЦР ложноотрицательный результат может быть получен у ВИЧ-инфицированных больных в период проведения специфического лечения, когда концентрация вирусов в крови настолько мала, что приводит к несрабатыванию тест-системы. В большинстве случаев ложноотрицательный результат получается при технической ошибке или браке в тест-системе, что встречается крайне редко ввиду проведения жесткого контроля качества на всех уровнях.

Анализ на ВИЧ необходимо отложить минимум на две недели после перенесенного инфекционного заболевания или вакцинации.

Рис. 7. Проведение серологического исследования крови.

Преимущества ИФА анализа крови

Специалисты отмечают, что данный тип тестирования крови сегодня наиболее распространенный и популярный. Он имеет массу плюсов перед другими видами тестирования.

Вот некоторые из них:

  1. Возможность провести диагностирование крови на ранних стадиях заболевания.
  2. Точность исследования.
  3. Возможность отслеживания тенденции проявления инфекции.
  4. Возможность проводить массовые исследования, так как уровень унификации тут высокий.
  5. Для возможности получения максимально правильного и точного результата потребуется мало времени.
  6. Удобство проведения анализа.
  7. Автоматизация некоторых процессов в лаборатории.
  8. Небольшая стоимость тестирования.

Также у этого способа диагностирования есть и свои недостатки. К таким можно отнести то, что результат тестирования иногда может быть ложным. Это не зависит от того, положительный он или отрицательный. Происходит такая ошибка по техническим причинам или сбоям, которые может давать оборудование. Также неточность результатов может зависеть и от состояния здоровья пациента, например, наличие у него хронического заболевания или прием определенных лекарственных препаратов.

Также стоит отметить, что на качество тестирования влияет и специализация доктора. Поэтому рекомендуется все анализы сдавать и проводить только в присутствии квалифицированного врача и в лабораторных условиях. Зная эти моменты, вам будет проще принять правильное решение при необходимости сдачи крови на анализ ИФА.

Тест-системы, определяющие наличие антител к ВИЧ

При помощи тестирования на антитела к вирусу иммунодефицита человека оценивается ответ организма на инфицирование. С этой целью применяется иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA), позволяющий обнаружить антитела к белкам вируса и подтверждающий анализ иммуноблотинг (вестерн-блот), при помощи которого определяется реакция антител на белки вируса.

Антитела к ВИЧ

Вирусы иммунодефицита человека обладают антигенными свойствами и при попадании в организм человека вызывают синтез антител — специфических иммуноглобулинов. С помощью современных тест-систем в сыворотке крови и других биологических жидкостях больного ВИЧ можно определить класс иммуноглобулинов (антител). Раньше всех (через неделю после инфицирования) появляются иммуноглобулины класса IgМ. Их рост отмечается в течение месяца и далее они сохраняются еще около 30 дней. Иммуноглобулины класса IgG циркулируют в крови несколько лет. Их выявление является показателем наличия ВИЧ-инфекции.

Антитела к ВИЧ появляются через 2 — 4 нед. после инфицирования и далее они определяются в крови на протяжении всего заболевания.

Период «окна» при ВИЧ

Антитела в организме инфицированного человека вырабатываются не сразу. На первых порах ВИЧ-инфекция ничем себя не проявляет. Антитела появляются в крови в среднем через 2 — 3 месяца от момента заражения (от 2-х недель до 6-и месяцев). Этот период получил названия «окна», когда анализы на антитела еще отрицательные, но вирусы интенсивно размножаются, а сам больной становится опасным в плане заражения контактных лиц. Выявить инфицированного можно через более короткий (1 — 2 недели) период после заражения, для чего применяется полимеразная цепная реакция (ПЦР). Однако из-за дороговизны данный вид исследования для скрининга не используется.

Иммуноферментный анализ при диагностике ВИЧ

У 90 — 95% инфицированных лиц антитела в сыворотке крови появляются через 3-и месяца после заражения, У небольшой части больных (5 — 9 %) антитела появляются в период от 3 до 9 месяцев и у 0,5 — 1% — в более поздние сроки. В терминальной стадии СПИДа количество антител снижается значительно, а в некоторых случая исчезают вовсе.

С 1985 года данная методика используется на территории РФ с целью массовых исследований. Он прост в исполнении, показывает довольно точные результаты, является дешевым по сравнению с другими методиками. В связи с возможностью получения ложноположительных результатов все положительные результаты исследуются дважды, после чего сыворотка крови больного исследуется подтверждающим тестом — иммунного блота. При этом используется тот же образец крови. При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

В РФ используются обычно ИФА 4-го поколения. Исследование проводится с целью получения суммарного спектра антител против белков (антигенов) ВИЧ — р24 и gр160.

Тест видит как антитела, которые вырабатываются организмом больного, так и антигены (белки вируса) р24. «Период окна» для тестов 4-го поколения более короткий. Уже через месяц можно получать достоверные результаты. Однако более надежными, как считают специалисты здравоохранения РФ, являются сроки 6, 8 или 12 недель.

Рис. 8. На фото иммуноферментные анализаторы.

Рис. 9. На фото иммуноферментный автоматический анализатор.

Для первичного обследования групп лиц с целью выявления ВИЧ-инфекции применяется только методика ИФА.

Метод иммуноблотинга

Метод иммуноблотинга является более точным, чем ИФА, по мнению большинства специалистов — эталонным. С его помощью в сыворотке крови обнаруживают антитела к белкам ВИЧ. Методика применяется с целью подтверждения результатов, полученных при проведении ИФА. Обладает высокой специфичностью. Ложноположительные результаты встречаются редко. Достоверность полученных результатов достигает 99%. Иммуноблотинг является дорогостоящей методикой и требует высокой специализации специалиста, проводящего исследование. Возможно получение сомнительных результатов.

Метод основан на разделении антигенов (белков) ВИЧ с применением электрофореза по молекулярной массе. Первыми при инфицировании выявляются антитела против капсидных белков «Gag» (р24 и р17) и прекурсор р55. Вслед за ними появляются антитела против суперкапсидных белков «Env» (гликопротеидов gр 160, gр120, gр41 и белков р88) и неструктурных белков «Pol» (р31, р51 и р66). В ряде случаев могут определяться антитела против генов «vpu», «vpr», «vif», «tat», «nef», «rev», «tat».

Сыворотка крови больных ВИЧ-1 и ВИЧ-2 содержит антитела ко всем белкам вирусов, но для подтверждения диагноза определяются у ВИЧ-1 только антитела к белкам р24, gр41, gр120 и gр160, у ВИЧ-2 — антитела к белкам gр105, gр140 и gр36.

При наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе ставиться диагноз ВИЧ-инфекции.

Рис. 10. Аппарат для проведения исследования методом иммуноблота.

Рис. 11. Диагноз ВИЧ-инфекции ставиться при наличии 2-х положительных результатов с применением ИФА и иммуноблота в одной пробе.

Какие бывают иммуноглобулины

Открыто и изучено 5 основных классов иммуноглобулинов – IgА, IgM, IgG, IgD, IgE. роль остальных еще до конца не выяснена и она находятся в стадии научного исследования.

Основная задача иммуноглобулина А (IgA) заключается в защитных функциях слизистых оболочек дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и мочевыделительной системы. При остром начале заболевания выявить их невозможно. Появляются эти защитные комплексы лишь со 2 недели начала заболевания, иногда позже. Основная масса иммуноглобулина А сосредоточена в слизистых тканях. Ориентировочно около 80%. Остальные антитела циркулируют в крови.

Основная функция – обезвреживание и уничтожение микроорганизмов. После стихания острых проявлений заболевания количество этих иммуноглобулинов начинает уменьшаться и полностью уходит на сроке до 8 недель после начала болезни. Если IgA обнаруживаются в более поздние сроки, то это свидетельствует о хронизации процесса.

Главными и первыми маркерами острой фазы развивающейся патологии являются иммуноглобулины класса М (IgM). Обнаруживаются они к 5 суткам начала недомогания. Определить их наличие в крови можно около 6 недель. Затем они начинают быстро исчезать.

Остаточный иммунный ответ характеризует наличие в крови иммуноглобулинов класса G (IgG). Появление этих факторов в крови обнаруживается примерно через месяц после начала болезни. В дальнейшем они могут определяться в течение многих месяцев, лет и даже всю жизнь, выполняя защитную функцию от возврата (рецидива) болезни, а в некоторых случаях делая невозможным вторичное развитие патологии.

Если же количество иммуноглобулина G начало вновь расти, то можно подозревать повторное заражение. Подобный вывод можно сделать путем проведения двух-трех проб, сделанных с промежутком в 2 недели.

Иммуноглобулин Е (IgE) используется в практике паразитологии.Иммуноглобулин D (IgD) располагается на B-лимфоцитах, находится в небольшой концентрации у здоровых людей. После 10 года жизни достигает максимальных значений. Количество иммуноглобулина D увеличивается при беременности, у больных системными заболеваниями соединительной ткани, бронхиальной астмой, заболеваниями, вызванные иммунодефицитным состоянием.

Процедура иммуноферментного анализа

В первую очередь необходимо подготовить специальные планшеты из полистирола, которые содержат 96 лунок. Перед анализом стенки каждой ячейки обрабатывают адсорбирующим антигеном.

В обработанные ячейки капают сыворотку крови. Гомологичные антитела и антигены реагируют друг с другом, образуя прочные связи. Не прикрепившиеся тельца вымываются. Затем в лунки добавляются антитела иммуноглобулинов вместе с помеченными особым образом ферментными элементами.

Реагенты помечаются для облегчения идентификации антител в анализируемой сыворотке. Хромогенный элемент, который ускоряет реакцию и подкрашивает лунки, добавляется после промывания. Интенсивность окраски по сравнению с изучаемым ферментом показывает примерное процентное содержание антигена в пробе крови.

Затем лаборант использует оптическую жидкость, чтобы:

  • замерить концентрацию антител в лунках;
  • сравнить полученный результат с контрольной пробой, то есть эталоном;
  • подсчитать концентрацию антител при помощи специальной шкалы.

Для анализа на глистные инвазии используется особый вариант системы тестирования, со своим набором показателей нормы и отклонений от неё.

Подготовка к анализу

Забор сыворотки крови для иммуноферментного анализа проводится только в условиях лаборатории. Берут кровь из вены, удаляют оттуда элементы, способные повлиять на процесс анализа и точность его результатов. Сдают анализ утром на голодный желудок.

Расшифровка результатов иммуноферментного анализа

Качество и количество антител говорит о присутствии чужеродных элементов в организме пациента, в том числе болезнетворных микроорганизмов. Эти же признаки указывают на то, что в организме начался воспалительный процесс.

Пример расшифровки результатов ИФА:

Стадия заболевания IgA IgM IgG
Первичная (2 недели с момента инфицирования) +
Первичная (2,5-3 недели с момента инфицирования) + +
Первичная (3-4 недели с момента инфицирования) + + +
Обострение хронической фазы (2 недели с начала обострения) + +
Хроническая +/- +
Прошедшая (инфекция излечена) +
Выздоровление Титр снизился в 2-4 раза после успешного лечения Титр снизился в 4-8 раза спустя 1-1,5 месяца после успешного лечения
Результат отрицательный

Сам по себе количественный анализ, проведённый данным методом, ещё не даёт возможность точно диагностировать болезнь, назначить курс лечения и определить дозировку препаратов.

Плюсы и минусы ИФА

У всех методик тестирования, даже самых передовых и высокоточных, к сожалению, кроме преимуществ, есть и свои недостатки.

Преимущества иммуноферментного анализа:

  • Специализация метода диагностики;
  • Повышенная чувствительность этого метода;
  • Применение новейших технологий.

Чувствительность метода диагностики — это высокая вероятность обнаружить искомое, даже если его концентрация в исследуемом материале крайне мала.

Специфичность методики означает:

  • высокую степень достоверности, то есть отсутствие риска получить ложный результат. Если результат положительный, то пациенту гарантировано, что обнаружен именно тот вид паразитов, от которого он страдает;
  • влияние на результат «человеческого фактора», то есть возможных ошибок лаборанта, сведено к нулю, что также способствует повышению точности.

Возможные недостатки данного метода анализа:

  1. Он предполагает определение природы болезни, то есть интуитивно «угадать» правильный диагноз в данном случае невозможно;
  2. Высокая стоимость анализа.

Тест-системы для подсчета СД4-лимфоцитов

Одним из иммунологических тестов, применяемых при ВИЧ-инфекции, является методика подсчета СD4 и СД8-лимфоцитов в крови.

СD4-лимфоциты (Т-хелперы) поражаются вирусами иммунодефицита. Постепенное истощение их популяции приводит к снижению иммунитета и организм больного перестает противостоять инфекции. Подсчет CD4-лимфоцитов осуществляется методом проточной цитометрии с помощью автоматических анализаторов или вручную при оптической или флюоресцентной микроскопии. По количеству СD4-лимфоцитов определяется время начала специфического лечения (антиретровирусной терапии) и профилактики оппортунистических инфекций, оценивается эффективность лечения.

  • При количестве CD4-лимфоцитов в сыворотке крови от 500 и ниже в 1 мл говорит о развитии иммунодефицита.
  • При снижении количества CD4-лимфоцитов до 200 в 1 мл (норма от 600 до 1900 клеток в 1 мл) развивается синдром приобретенного иммунодефицита — СПИД.
  • При снижении уровня CD4-лимфоцитов до 50 и ниже в 1 мкл СПИД переходит в терминальную стадию.

Удельный вес CD4-лимфоцитов среди всех лимфоцитов в норме составляет около 40%. Снижение показателя до 20% говорит о развитии СПИДа.

CD8-лимфоциты (Т-киллеры, на англ. killer — убийца) уничтожают вирусы ВИЧ путем цитолиза. Их пролиферация (увеличение количества) зависит от активности Т-хелперов. При ВИЧ-инфекции количество CD4 и CD8-лимфоцитов уменьшается, но более всего падает уровень CD4-лимфоцитов. Соотношение CD4/ CD8 в норме составляет 1,5 — 2,5. При снижении количества CD4- лимфоцитов отмечается снижение индекса.

Его величина менее 1 говорит о развившемся иммунодефиците, при показателе соотношения 0,6 — 0,8 развивается СПИД.

При получении положительных результатов тестирования человек должен стать на учет в государственное учреждение Центр профилактики и борьбы со СПИД, где будет установлен мониторинг за его состоянием и назначено адекватное специфическое лечение.

Рис. 12. На фото проточные автоматические анализаторы с помощью которых осуществляется подсчет CD4-лимфоцитов в крови исследуемого.

Тест на ВИЧ с применением ПЦР

Все большее распространение в последние годы получает молекулярно-генетический метод диагностики ВИЧ-инфекции — полимеразная цепная реакция (ПЦР). С ее помощью определяется генетический материал возбудителя — РНК уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения, а высокая чувствительность теста позволяет выявлять РНК вирусов даже если их в исследуемом материале находятся единицы. Данная методика является дорогостоящей и поэтому в настоящее время для скрининга не используется. К тому же значимой проблемой исследования является возможность получения ложноположительных результатов.

Суть методики ПЦР при ВИЧ

Суть данной методики заключается в получении множества копий РНК вируса (нуклеиновой кислоты), в последующем выявляемых как по характерному строению, так и с помощью меченых ферментов или изотопов.

Возможности ПЦР при ВИЧ-инфекции

С помощью ПЦР можно разрешить сомнительные результаты, полученные при применении методики иммуноблотинга, диагностировать ВИЧ-инфекцию на ранних стадиях (уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения), контролировать эффективность проводимой антиретровирусной терапии, определять стадию заболевания.

Анализы ПЦР рекомендовано сдавать спустя 4 недели от момента предполагаемого риска.

Рис. 13. На фото слева нормальный Т-лимфоцит, справа — Т-лимфоцит, инфицируемый ВИЧ. Видны множественные пузыри, между которыми появились новообразованные вирусы (мелкие округлой формы образования). С помощью ПЦР ВИЧ-инфицированность выявляется уже через 1 — 2 недели после предполагаемого заражения.

Преимущества методики ПЦР при ВИЧ

  • С помощью ПЦР возможно выявить сам вирус и его количество.
  • Возможность использования у детей младше полутора лет.
  • Проводить оценку эффективности лечения.
  • Определить тяжесть и прогноз заболевания.

Недостатки методики ПЦР при ВИЧ

  • Большая стоимость исследования.
  • Наличие специализированных лабораторий.
  • Длительность получения результатов (до 4-х недель).

Кому проводится ПЦР

  1. Получение результата на 7 — 10 день лицам в случае предполагаемого инфицирования, когда желателен результат, полученный в короткие сроки.
  2. Для определения срока начала и оценки эффективности проводимого лечения.
  3. ПЦР проводится инфицированным беременным за 4 недели до родов с целью решения вопроса о применения кесарево сечения.
  4. Новорожденным от инфицированных матерей. Дважды полученный положительный результат свидетельствует о заражении ребенка.

В обычных условиях для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции ПЦР не используется

РНК ПЦР и ДНК ПЦР. В чем разница

  • РНК ПЦР доказывает факт наличия вируса иммунодефицита в крови и объем выявленной РНК. Данное исследование применяется у диагностированных лиц с целью оценки эффективности проводимой терапии.
  • С помощью ДНК ПЦР определяется наличие вируса в мононуклеарных клетках у детей, когда антитела к вирусу иммунодефицита человека у матери мешает использовать методику ИФА.

Вирусная нагрузка

Вирусная нагрузка определяется путем подсчета количества РНК-копий в 1 мл плазмы крови, что позволяет определить стадию заболевания, провести анализ проводимого специфического лечения, определить тяжесть и прогноз заболевания. Чем выше вирусная нагрузка, тем меньше в плазме крови регистрируется CD4-лимфоцитов.

Интерпретация результатов:

  • РНК либо не выявлена, либо число копий РНК менее 20 в 1 мл. плазмы.
  • РНК выявлена на пределе чувствительности — менее 20 копий/мл.
  • РНК от 20 до 106 копий в 1 мл плазмы крови говорит о достоверности результата.
  • РНК-копий более 106мл — верхний предел линейного диапазона.

Увеличение вирусной нагрузки у больного с ВИЧ-инфекцией в три и более раза является клинически значимым результатом.

Контроль над вирусной нагрузкой проводится каждые 3 месяца у больных, лечение которым еще не проводится. В случае начала проведения антиретровирусной терапии контроль осуществляется через 2 — 8 недель.

Рис. 14. ПЦР в последние годы пользуется все большей популярностью.

Рис. 15. Амплификаторы для проведения ПЦР.

Тест на ВИЧ необходимо проводить на ранних сроках инфицирования и периодически при заболевании, что обеспечит своевременное назначение антиретровирусной терапии предупреждение и развития грозных инфекционных и онкологических процессов.

Культивирование вируса

Обнаружить вирусы, его РНК, ДНК, антигены и антитела можно не только в сыворотке крови, но и сперме, слюне, содержимом влагалища и др. Культивируют ВИЧ в культуре клеток лимфоцитов. Методика является высокочувствительной и специфичной (до 100%), однако дороговизна исследования не позволяет его использовать в повседневной лабораторной работе.

Общий анализ крови на ВИЧ

В результате поражения вирусами иммунодефицита человека кроветворных органов отмечается угнетение кроветворения, что проявляется снижением числа лимфоцитов (лимфопения), нейтрофилов (нейтропения), тромбоцитов (тромбопения) и анемия. К тому же на разрушение клеточных популяций оказывают влияние аутоиммунные процессы, развивающиеся у ВИЧ-инфицированных больных. В сыворотке крови больных доминирут иммуноглобулины IgG.

Рис. 16. Забор крови из вены и пальца для анализов.

Сегодня сдать анализ на ВИЧ можно любому человеку анонимно и бесплатно за считанные минуты, а современное оборудование и обученный персонал позволяют получить максимально точные результаты.

ССЫЛКИ ПО ТЕМЕСтатьи раздела «ВИЧ-инфекция”Самое популярное

Врач КЛД высшей категории Зорич Анжелика Анатольевна

Антигенное строение бледной трепонемы

Наиболее изучены следующие антигены:

— протеиновые антигены бледной трепонемы; имеют в своем составе фракцию, общую для патогенных и непатогенных трепонем, кроме того, имеется фракция, специфичная только для патогенных трепонем, антитела против них появляются в организме в конце инкубационного периода или в течение первой недели после появления твердого шанкра;

— антигены полисахаридной природы; малоиммуногенны, т.к. антитела против них не достигают значительных титров, поэтому роль этих антител в серодиагностике сифилиса незначительна;

— липидные антигены бледной трепонемы; составляют около 30% сухой массы клетки; помимо липидов бледной трепонемы в организме больного появляется большое количество веществ липидной природы в результате разрушения клеток тканей, в основном, липидов митохондриальных мембран; по-видимому, они имеют такое же строение, как и липидные антигены бледной трепонемы и обладают свойствами аутоантигенов; антитела в организме больного пояляются примерно на 5 — 6й неделе после заражения.

Следовательно, сифилитические антитела могут быть неспецифическими (реагины) и специфическими (противотрепонемными). Реагины направлены против липидных антигенов бледной трепонемы и против аутоантигенов, возникающих вследствие деструкции клеток организма. Следует иметь в виду, что реагины обнаруживаются также в нормальных тканях, и их количество повышается при различных физиологических и патологических состояниях. Эти реагины могут быть причиной так называемых биологических ложноположительных серологических реакций на сифилис.

Специфические антитрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, направлены против бледной трепонемы и, так же как и антигены трепонемы, могут быть группоспецифичными и видоспецифичными.

Для определения антител в сыворотке крови больного используют различные серологические реакции, отличающиеся друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Учитывая, что все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными, их следует ставить в комплексе и, в случае необходимости, в динамике.

Серологические реакции, в зависимости от выявляемых ими антител, подразделяются на группы:

— липидные (реагиновые) реакции неспецифичные, нетрепонемные:

микрореакции на стекле с липидными антигенами — экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации — МРП, VDRL, CMF, RPR и др.); реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами — реакция Вассермана; осадочные реакции (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса — Витебского и др.);

— групповые трепонемные реакции групповые и видоспецифичные:

зависят от антигенов, входящих в состав набора: РСК с протеиновым антигеном Рейтера; реакция иммунофлюоресценции (РИФ); реакция иммунного прилипания (РИП); реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); РИФ Абс. и ее варианты (IgM FTA ABS, 19S IgM FTA ABS, и др.); реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА); иммуноблот IgM, IgG.

Различные серологические реакции используются для различных практических целей. При массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются отборочные реакции (VDRL, RPR, МРП и др.) Для диагностики (подтверждения) сифилиса у кардиологических, психоневрологических, офтальмологических пациентов, а также беременных женщин применяют определение суммарных антител IgM, IgG в любой иммунологической реакции (на сегодняшний день — ИФА). С целью контроля за эффективностью терапии рекомендуют VDRL в количественном исполнении или определение IgM в иммунологической реакции (ИФА). В качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций применяют иммуноблот IgM, IgG. В иммуноблоте используется 5 разделенных антигенов: р15, р17, р22, р45 и р47. Из них специфичными являются 4 белка, р22 — неспецифичен. Поэтому наличие полосы р22 имеет принципиальное значение и в ряде случаев объясняет наличие ложноположительного результата. Наличие даже одной специфичной полосы IgM расценивается как положительный результат, наличие одной специфичной полосы IgG — как сомнительный результат, рекомендуется исследование в динамике и иммуноблот IgM.

Прямые трепонемные тесты

— темнопольная микроскопия: бледная трепонема плохо окрашивается традиционными красителями, поэтому используется темнопольный микроскоп. Материал для исследования при первичном сифилисе — это материал из шанкра, при вторичном — из эрозивных папул.

— ПЦР: — при первичном сифилисе можно исследовать материал из шанкра, при вторичном — из эрозивных папул. При раннем вторичном сифилисе в момент первых высыпаний ДНК можно найти в венозной крови. При обычном мазке из влагалища, шейки матки, уретры — бледная спирохета не определяется. Этот метод всегда рекомендован при отрицательных данных темнопольной микроскопии, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

Какая динамика серологических исследований при сифилисе?

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования. Специфические противотрепонемные антитела IgM обнаруживаются в конце второй недели от момента инфицирования. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после контакта. Таким образом, к моменту появления клинических симптомов сифилиса (образование твердого шанкра) в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM, так и специфические IgG (суммарные антитела) . Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения. Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени, а иногда и всю жизнь.

РИБТ пол
противотрепонемные lgG пол. (ИФА, иммуноблот)
противотрепонемные lgМ пол. (ИФА, иммуноблот)
реагины (lgМ + lgG) пол. MOP, RPR, VDRL
лимфаденит полиаденит
инк. период шанкр первичная розеола
нед 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Ложноположительные серологические реакции на сифилис

В случаях ложноположительных серологических реакций в сыворотке крови обследуемых людей имеются только реагины, но отсутствуют специфичные антигены и антитела.

Различают следущие группы состояний:

— инфекционные заболевания, возбудители которых имеют антигенное сходство с бледной трепонемой (возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, лептоспироз, воспалительные процессы, обусловленные трепонемами, сапрофитирующими в полости рта и на половых органах);

-физиологические и патологические состояния, приводящие к изменению обмена веществ, особенно липидного (беременность, подагра, сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, диффузные болезни соединительной ткани, инфаркт миокарда, сотрясение мозга, искусственная иммунизация, онкологические заболевания, отравление свинцом, фосфором, хлороформом, прием сацилата натрия, дигиталиса и пр.);

— технические погрешности при постановке реакций.

Различают острые и хронические ложноположительные реакции. Острые ложноположительные реакции не стойки и их спонтанная негативация происходит в течение 4 — 6 месяцев. Хронические реакции сохраняются положительными более 6 месяцев.

Причинами острых биологически ложноположительных реакций являются беременность (особенно в последние недели ее и в первые 10 дней после родов), воспаление легких, в частности микоплазменной этиологии, корь, энтеровирусная инфекция, инфекционный мононуклеоз, вакцинация, наркомания, алкоголизм. Реже они наблюдаются при активном туберкулезе, скарлатине, вирусной пневмонии, бруцеллезе, риккетсиозах, лептоспирозе, кори, венерической лимфогранулеме, малярии, белковом голодании.

У больных, прекративших принимать наркотики, ложноположительные серологические реакции на сифилис сохраняются до 14 месяцев. Иногда причинами неспецифических серологических реакций бывают обширные травмы, сотрясение мозга, переломы, инфаркт миокарда, а также технические погрешности при постановке реакций.

Хронические ложноположительные стандартные серологические реакции могут наблюдаться у больных лепрой, системной красной волчанкой, тиреоидитом Хашимото, ревматизмом, узелковым периартериитом, циррозом печени, саркоидозом, генерализованной склеродермией, криоглобулиновой пурпурой, злокачественными опухолями, малярией, туберкулезом, бруцеллезом, лептоспирозом, инфекционным мононуклеозом, сахарным диабетом, болезнями крови, гипертонической болезнью, хроническим алкоголизмом и наркоманией. С возрастом количесво ложноположительных результатов увеличивается. У женщин они наблюдаются в 4,5 раза чаще, чем у мужчин. Иногда причины ложноположительных реакций остаются неясными (идиопатические реакции) или они наблюдаются спонтанно в некоторых семьях.

Неспецифические серологические реакции составляют в среднем 0,03 — 2,5 %. Чаще бывают слабоположительными, а если положительными, то с низким титром сифилитических реагинов. При некоторых заболеваниях (лимфомах, хроническом лимфолейкозе, ревматоидном артрите, раке печени) титр их, однако, может быть высоким. При повторном исследовании неспецифические реакции становятся отрицательными или выраженность их снижается, в то время как титр сывороток больных сифилисом остается таким же или нарастает.

При неспецифических результатах наблюдаются расхождения нескольких реакций. Иногда отмечается несовпадение результатов реакций при постановке ее с разными антигенами: c одним антигеном получают положительные результаты, с другим — отрицательные. В случае резкого расхождения исследования надо повторить с новой порцией крови, но не раньше, чем через неделю. Наиболее достоверным критерием истинно сифилитических показаний классических серологических реакций является результат, полученный при исследовании крови с помощью иммуноблота IgM, IgG.

Особенность диагностики сифилиса в «Евромеде»

Неспецифичные реагины определяются RPR тестом с кардиолипиновым антигеном с добавкой угольных частиц. Производитель: HUMAN, Германия.

Серологическая диагностика сифилиса проводится методом иммунохемилюминесценции, при этом определяются суммарные антитела IgM и IgG к специфичным трепонемным антигенам р15, р17, р47 — это такой суммарный мини иммуноблот! Чувствительность и специфичность тест системы более 99%. Производитель ABBOT , Германия.

Какие заболевания выявляют методом иммуноферментной диагностики?

Перейдем к рассмотрению того, какие заболевания и какие биологически активные вещества выявляются методом иммуноферментного анализа. Вещества, выявляемые методом иммуноферментного анализа, представлены в таблице.

Гормоны и маркеры заболеваний щитовидной железы Тиреопероксидаза (ТПО)
Тиреоглобулин (ТГ)
Тиреотропный гормон (ТТГ)
Тироксин (Т4)
Трийодтиронин (Т3)
Свободный тироксин (Т4)
Свободный трийодтиронин (Т3)
Диагностика репродуктивной функции Лютеинизирующий гормон (ЛГ)
Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ)
Хорионический гонадотропин (ХГ)
Пролактин
Прогестерон
Эстрадиол
Тестостерон
Кортизол
Стероид связывающий глобулин (ССГ)
Альфафетопротеин (АФП)
Онкомаркеры Хорионический гонадотропин (ХГ)
Простатспецифический антиген (ПСА)
СА – 125
СА – 19.9
CYFRA – 21-1
М – 12 (СА – 15.3)
MUC – 1 (M – 22)
MUC1 (M – 20)
Альвеомуцин
К – цепь
L – цепь
Фактор некроза опухолей (ФНОα)
γ – интерферон
Раково-эмбриональный антиген (РЭА)
Диагностика инфекционных заболеваний Токсоплазма (IgG, IgM)
Краснуха (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Герпес (IgG, IgM)
Туберкулез (IgG, IgM)
Корь (IgG, IgM)
Гепатит Д, Е, А (ВГД, ВГЕ, ВГА)
Гепатит С (ат ВГС, ВГСсore)
Гепатит В (НВs, НВе НВсore)
Уреаплазма (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG, IgM)
Хламидия (IgG, IgM)
Микоплазма (IgG)
Сифилис (IgG)
Аспергиллёз (IgG)
Лямблии (IgG)
Helicobacter Pylori (IgG)
Псевдотуберкулез (IgG, IgM)
Кандида (IgG)
Герпес (IgG, IgM)
Эпштейн-Барр (IgG, IgM)
Цитомегаловирус (IgG, IgM)
Диагностика аутоиммунных заболеваний и определение иммунного статуса IgE – общий
С-реактивный белок (СРБ)
Глиадин (IgG, IgA)
IgG4
Общий IgG
IgG2
Общий IgA
Секреторный IgA
Общий IgD
Общий IgМ
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
Маркеры заболеваний сердца Тропонин I

В таблице приведен далеко не полный перечень анализов (только наиболее распространенные), выполняемых с помощью иммуноферментного анализа. Привести же весь список не представляется возможным, поскольку он будет очень большим и постоянно пополняющимся. Помимо лабораторной диагностики метод иммуноферментного анализа широко используется в научных исследованиях.
Наседкина А.К.

Иммунная реакция, что это? Что такое антитело, антиген?

Что такое иммунная реакция? Что такое антиген?
В первую очередь разберем, что такое иммунные реакции. Иммунные реакции – это специфические реакции связывания антигена с антителом с образованием иммунного комплекса. Что это значит? На поверхности каждой клетки любого организма имеются особые структуры, которые называются антигены. Антигены в целом – это молекулы, которые несут информацию о клетке (подобно информации на бейдже у человека, где указываются основные данные этого человека).
Индивидуальные и видовые антигены – что это? Зачем нужны эти антигены?
Имеются антигены индивидуальные, то есть присущие только данному конкретному организму. Эти индивидуальные антигены разные у всех людей, есть похожие друг на друга, но все равно отличающиеся. Двух одинаковых копий индивидуальных антигенов в природе не существует!
Второй основной тип антигенов – это видовые антигены, то есть присущие какому-либо конкретному виду живых существ. Например, у человека присутствует свой видовой антиген, общий для всех людей, у мышей имеется свой мышиный видовой антиген и т.д. На поверхности каждой клетки обязательно присутствуют видовой и индивидуальный антиген.
Видовой антиген используют клетки иммунной системы для опознавания «свой – чужой».
Как происходит узнавание антигена?
Иммунная клетка связывается с подозрительной клеткой и проводит опознание именно по индивидуальному антигену. В памяти иммунной клетки «записано» как выглядит «свой антиген». Таким образом, если антиген подозрительной клетки совпадает с описанием «свой антиген», значит, эта клетка собственного организма и опасности не представляет. Тогда иммунная клетка «отвязывается» и уходит. А если антиген не совпадает с описанием «свой», тогда иммунная клетка идентифицирует эту клетку как «чужой», а значит потенциально опасный для всего организма. В этом случае иммунная клетка не «отвязывается», а начинает уничтожать опасный объект. Точность такого иммунологического узнавания поражает воображение – 99,97%. Ошибок практически не бывает!
Что такое антитело, иммунный комплекс?
А что представляет собой антитело?
Антитело – это особая молекула, расположенная на поверхности иммунной клетки. Именно антитело и связывается с антигенами подозрительной клетки. Далее антитело передает информацию внутрь клетки, где происходит опознавание, и получает обратный сигнал двух видов «свой» или «чужой». При сигнале «свой» антитело разрушает связь с антигеном и отпускает клетку.
Что такое иммунный комплекс?
При сигнале «чужой» ситуация разворачивается иначе. Антитело не разрывает связь с антигеном, а наоборот, посылая специфические сигналы, вызывает «подкрепление». Биологически это означает, что другие антитела, находящиеся в другой части клетки, начинают перемещаться к участку, откуда идет сигнал опасности, и также образуют связь между собой и пойманным антигеном. В конце концов, антиген оказывается, окружен со всех сторон и прочно привязан.Такой комплекс антиген + антитело называется иммунный комплекс. С этого момента начинается утилизация антигена. Но сейчас подробности процесса нейтрализации антигена нас не интересуют.

Виды антител (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антитела – это белковые структуры, которые, соответственно, имеют химическое название, которое и используется как синоним слова антитела. Итак, антитела = иммуноглобулины.
Существуют 5 типов иммуноглобулинов (Ig), которые связываются с разными видами антигенов в разных местах человеческого организма (например, на коже, на слизистых, в крови и т. д.). То есть антитела имеют разделение труда. Эти иммуноглобулины называются буквами латинского алфавита – A, M, G, D, E и обозначаются следующим образом – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.
В диагностике используют только один вид антител, который наиболее специфичен в отношении определяемого микроба. То есть связывание данного вида антител с определяемым антигеном происходит всегда. Чаще всего применяются IgG и IgM.
Именно этот принцип иммунной реакции (уникальная точность и специфичность узнавания определяемого биологического объекта) лежит в основе иммуноферментного анализа.В силу высокой точности антител в узнавании антигенов, точность всего метода иммуноферментного анализа оказывается также высочайшей.

Ферментативная реакция

Какая реакция – ферментативная? Что такое сродство, субстрат и продукт реакции?
Перейдем к рассмотрению ферментативной реакции в работе метода иммуноферментного анализа.
Что такое ферментативная реакция?
Ферментативная реакция – это химическая реакция, при которой одно вещество под действием фермента превращается в другое. Вещество, на которое действует фермент,называется субстратом. А вещество, которое получается в результате воздействия фермента, называется продуктом реакции. Причем особенность ферментативной реакции такова, что определенный фермент действует только на определенный субстрат. Такое свойство фермента узнавать «свой» субстрат называется сродством.
Таким образом, каждый фермент проводит только одну, специфичную для него реакцию. Ферментов в биологическом мире известно великое множество, равно как и ферментативных реакций. В иммуноферментной диагностике используется лишь несколько ферментативных реакций – не более 10.При этом выбирали такие ферментативные реакции, продуктом которых являются окрашенные вещества. Почему же продукты ферментативной реакции должны быть окрашенными? Потому что для вычисления концентрации вещества по окрашенному раствору существует простой химический метод – колориметрия.

Метод колориметрии – суть и принцип

Колориметрия применяет измерение плотности окраски раствора, а по плотности окраски вычисляют концентрацию вещества.При этом специальный прибор – колориметр измеряет плотность окраски раствора. В колориметрии возможны два варианта зависимости плотности окраски от концентрации вещества – это прямо пропорциональная зависимость или обратно пропорциональная зависимость. При прямо пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем интенсивнее плотность окраски раствора. При обратно пропорциональной зависимости, чем выше концентрация вещества, тем ниже плотность окраски раствора. Технически это происходит так: берется несколько растворов с известной концентрацией вещества, измеряется плотность этих растворов, строится график зависимости концентрации от плотности окраски (калибровочный график).
Далее измеряют плотность окраски раствора, концентрацию которого выясняют, и по калибровочному графику находят значение концентрации, соответствующее уровню измеренной плотности окраски раствора.В современных автоматических колориметрах только один раз проводят калибровку, далее аппарат сам строит калибровочную кривую, которая остается в памяти прибора, и измерение происходит автоматически.
В иммуноферментном анализе чаще всего применяются следующие ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза, авидин.
Как же совмещаются иммунологическая и ферментативная реакция в иммуноферментном анализе? Сейчас мы перейдем к рассмотрению собственно иммуноферментного анализа. Какие этапы он включает и что происходит при протекании этих реакций? Иммуноферментный анализ бывает прямой и непрямой.